液相色譜儀只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發性的限制，流動相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩定和非揮發性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質。
與試樣預處理技術相配合，HPLC所達到的高分辨率和高靈敏度，使分離和同時測定性質上十分相近的物質成為可能，能夠分離復雜相體中的微量成分。隨著固定相的發展，有可能在充分保持生化物質活性的條件下完成其分離。
液相色譜儀的系統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相) 內， 由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數， 在兩相中作相對運動時， 經過反復多次的吸附- 解吸的分配過程， 各組分在移動速度上產生較大的差別， 被分離成單個組分依次從柱內流出， 通過檢測器時， 樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式打印出來。
液相色譜法的工作原理是儲液器中的流動相被高壓泵打入系統，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相)內，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數，在兩相中作相對運動時,經過反復多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式打印出來。
液相色譜分析法(HPLC)，它的基本概念及理論基礎（如保留值、塔板理論、速率理論、容量因子、分離度等），與氣相色譜 是一致的，但又有不同之處：液相色譜 與氣相色譜的主要區別可歸結于以下幾點：
進樣方式的不同：液相色譜只要將樣品制成溶液，而氣相色譜需加熱氣化或裂解；
流動相的不同，在被測組分與流動相之間、流動相與固定相之間都存在著一定的相互作用力；
由于液體的粘度較氣體大兩個數量級，使被測組分在液體流動相中的擴散系數比在氣體流動相中約小4~5個數量級；
由于流動相的化學成分可進行廣泛選擇，并可配置成二元或多元體系，滿足梯度洗脫的需要，因而提高了液相色譜的分辨率（柱效能）；
液相色譜采用5~10Lm細顆粒固定相，使流體相在色譜柱上滲透性大大縮小，流動阻力增大，必須借助高壓泵輸送流動相；
液相色譜是在液相中進行，對被測組分的檢測，通常采用靈敏的濕法光度檢測器，例如，紫外光度檢測器、示差折光檢測器 、熒光光度檢測器等；
液相色譜與氣相色譜相比較，液相色譜同樣具有高靈敏度、能和高速度的特點。
液相色譜儀的定性和定量分析，與氣相色譜分析相似，在定性分析中，采用保留值定性，或與其他定性能力強的儀器分析 法連用；在定量分析中，采用測量峰面積的歸一化法、內標法或外標法等，但液相色譜在分離復雜組分式樣時，有些組分常不能出峰，因此歸一化法定量受到限制，而內標法定量則被廣泛使用。
